Viime aikoina on kehitetty luotettava, erittäin herkkä ja nopea menetelmä ihmisten erilaisten tartuntatautien diagnosointiin. Tätä menetelmää kutsutaan "PCR-analyysiksi". Mikä se on, mikä on sen olemus, mitä mikro-organismeja se voi paljastaa ja kuinka se otetaan oikein, kerromme artikkelissamme.
Löytöhistoria
Yhdysv altalainen tiedemies Kary Mullis keksi polymeraasiketjureaktiomenetelmän (PCR) vuonna 1983. Aluksi diagnostisen menetelmän patentoi Cetus Corporation, jossa sen luoja työskenteli. Mutta vuonna 1992 kaikki oikeudet ja patentit myytiin Hoffman-La Rochelle. Sen jälkeen kävi ilmi, että samank altaisia tutkimuksia suoritettiin rinnakkain ja ne kirjasivat muut amerikkalaiset biologit, kuten Alice Chen, David Edgar, John Trell. Vuonna 1980 Neuvostoliiton tiedemiehet A. Slyusarenko, A. Kaledin ja S. Gorodetsky myös käsittelivät tätä ongelmaa. Tästä syystä oli mahdotonta määrittää ainoaa tekijänoikeuksien h altijaa. Monet merkittävät biokemistit ovat antaneet tietyn panoksen polymeraasiketjureaktiotekniikan kehittämiseen ja ovat patentoineet innovaationsa. Tällä hetkellä analyysiPCR suoritetaan kaikkialla erityisesti varustetuissa laboratorioissa.
PCR-diagnostiikkamenetelmän ydin
PCR-analyysi: mikä se on ja miten se toimii? Menetelmän ydin on lisätä tietyn mikrobiympäristön tilavuutta keinotekoisissa olosuhteissa käyttämällä erityistä DNA-polymeraasientsyymiä. Tätä varten olemassa oleva DNA-materiaali kerrotaan monta kertaa. Näin ollen, jos näytteessä on patogeeninen mikro-organismi, sen määrä kasvaa biokemiallisten laboratoriokäsittelyjen seurauksena, eikä bakteerin havaitseminen mikroskoopilla ole vaikeaa.
Miten materiaalitutkimus tehdään?
Tarvitaan analysointia varten:
- DNA-matriisi;
- pohjamaalit, jotka yhdistävät materiaalikappaleen päät;
- lämmönkestävä DNA-polymeraasientsyymi;
- kemikaalit, jotka saavat entsyymit toimimaan kunnolla;
- puskuriliuos, joka tarvitaan sopivien olosuhteiden luomiseksi DNA-materiaalin kasvulle ja kehitykselle.
PCR:n suorittamiseksi suoritetaan 25-30 toistoa, jotka koostuvat kolmesta vaiheesta: denaturaatio, hehkutus ja elongaatio.
Polymeeriketjureaktion analysointiin käytetään erityistä laitetta - vahvistinta. Nykyaikaisten laitteiden avulla voit asettaa tarvittavan ohjelman lämmitys- ja jäähdytysputkille, jotta voit poistaa virheet diagnostiikan aikana.
Missä diagnostiikkaa käytetään?
Polymeeriketjureaktiomenetelmää käytetään useilla lääketieteen aloilla:
- kriminalistien kanssase tunnistaa geneettisen materiaalin, kuten hiukset, syljen tai veren;
- PCR-veritesti auttaa genotyypin määrittämisessä, esimerkiksi yksilöllisen geneettisesti luontaisen reaktion havaitsemisessa tiettyyn lääkkeeseen;
- käyttäen tätä menetelmää perhesiteiden luomiseen ihmisten välillä;
- Lääketieteen diagnostiikassa suosituin PCR-menetelmä erilaisten tartuntatautien määrittämiseen.
Mitä infektioita PCR havaitsee?
Lääketiede on käyttänyt PCR-analyysiä pitkään ja menestyksekkäästi. Mikä se on, tiedämme jo. Ja mitä taudinaiheuttajia sillä voidaan havaita? Seuraavat tartuntataudit diagnosoidaan PCR-menetelmällä:
- hepatiitti A, B, C;
- ureaplasmoosi;
- kandidiaasi;
- klamydia;
- mykoplasmoosi;
- gardnerelloosi;
- tarttuva mononukleoosi;
- trikomoniaasi;
- papilloomavirusinfektio;
- tuberkuloosi;
- herpesinfektiotyypit 1 ja 2;
- helicobacteriosis;
- sytomegalovirus;
- kurkkumätä;
- salmonelloosi;
- HIV-infektio.
PCR-menetelmiä käytetään myös syövän diagnosoinnissa.
Menetelmän edut
PCR-diagnostiikassa on useita etuja:
- Suuri herkkyys. Jopa vain muutaman mikro-organismi-DNA-molekyylin läsnä ollessa, PCR-analyysi määrittää infektion olemassaolon. Menetelmä auttaa kroonisten ja piilevien sairauksien hoidossa. Usein tällaisissa tapauksissa mikro-organismion muuten viljelemätön.
- Kaikki materiaalit sopivat tutkimukseen, kuten sylki, veri, sukuelinten eritteet, hiukset, epiteelisolut. Yleisin on veren ja urogenitaalinäytteen analyysi PCR:ää varten.
- Pitkäaikaista satoa ei tarvita. Automaattisen diagnoosiprosessin avulla voit saada tutkimuksen tulokset 4-5 tunnin kuluttua.
- Menetelmä on lähes 100 % luotettava. Vain yksittäisiä vääriä negatiivisia tuloksia on kirjattu.
- Mahdollisuus tunnistaa useita taudinaiheuttajia yhdestä materiaalinäytteestä. Tämä ei vain nopeuttaa taudin diagnosointia, vaan myös vähentää merkittävästi materiaalikustannuksia. Usein lääkäri määrää kattavan PCR-analyysin. Tutkimuksen hinta, joka koostuu kuuden taudinaiheuttajan määrityksestä, on noin 1500 ruplaa.
Suosituksia analyysiin valmistautumisesta
Jotta tulokset olisivat luotettavia PCR-tutkimuksen aikana, sinun on suoritettava testi noudattaen diagnoosin alustavaa valmistelua koskevia suosituksia:
- Ennen syljen luovuttamista tulee pidättäytyä syömästä ja ottamasta lääkkeitä 4 tuntia ennen näytteenottoa. Huuhtele suusi keitetyllä vedellä välittömästi ennen toimenpidettä.
- Yllä olevia sääntöjä tulee noudattaa myös otettaessa näyte posken sisäpinn alta. Huuhtelun jälkeen on suositeltavaa tehdä kevyt ihohieronta, joka korostaa rauhasen eritystä.
- Vitsa kerätään yleensä kotona. Tätä varten sinun on suoritettava perusteellinen wcsukupuolielimissä. Kerää 50-60 ml virtsaa steriiliin muoviastiaan. Materiaalin puhtauden varmistamiseksi on suositeltavaa, että naiset laittavat tamponin emättimeen ja miehille vedetään ihopoimu mahdollisimman paljon taaksepäin. Älä lahjoita kuukautisten aikana.
- Jos haluat luovuttaa siittiöitä, sinun on pidättäydyttävä seksistä 3 päivää ennen näytteenottoa. Lääkärit eivät myöskään suosittele saunassa käymistä ja kuumaa kylpyä, alkoholin ja mausteisen ruoan juomista. Sinun on pidättäydyttävä virtsaamasta 3 tuntia ennen testiä.
- Esimerkiksi urogenitaalinäytteen ottamiseksi, jos PCR-testi tehdään klamydian var alta, sekä naisia että miehiä kehotetaan pitämään seksuaalista lepoa 3 päivän ajan. Antibakteerisia lääkkeitä ei pidä ottaa 2 viikkoa ennen analyysiä. Viikon ajaksi sinun on lopetettava intiimigeelien, voiteiden, emättimen peräpuikkojen, douchingin käyttö. 3 tuntia ennen tutkimusta on pidättäydyttävä virtsaamasta. Kuukautisten aikana näytteenottoa ei oteta, vain 3 päivää verenvuodon loppumisen jälkeen voit ottaa urogenitaalinäytteen.
PCR raskauden aikana
Vauvan odotusaikana monet sukupuolitaudit ovat erittäin vaarallisia sikiön normaalille kehitykselle. Sukupuolitaudit voivat aiheuttaa kohdunsisäistä kasvun hidastumista, keskenmenoa tai ennenaikaista synnytystä, lapsen synnynnäisiä epämuodostumia. Siksi on erittäin tärkeää tehdä PCR-tutkimus raskauden alkuvaiheessa. Analyysi on läpäistävä rekisteröinnin yhteydessä - enintään 12 viikkoa.
Materiaali on otettu kohdunkaulan kanavasta erityisellä harjalla. Toimenpide on kivuton eikä aiheuta vaaraa vauvalle. Yleensä raskauden aikana analysoidaan klamydia PCR-menetelmällä sekä ureaplasmoosi, mykoplasmoosi, sytomegalovirus, herpes, papilloomavirus. Tällaista tutkimuskompleksia kutsutaan nimellä PCR-6.
PCR HIV-diagnoosia varten
Koska polymeraasiketjureaktiomenetelmä on erittäin herkkä kehon muutoksille ja diagnoosin olosuhteille, monet tekijät voivat vaikuttaa tulokseen. Siksi HIV-infektion PCR-analyysi ei ole luotettava menetelmä, sen tehokkuus on 96–98%. Lopuissa 2-4 %:ssa tapauksista testi antaa vääriä positiivisia tuloksia.
Mutta joissakin tilanteissa HIV-PCR-diagnostiikka on välttämätöntä. Sitä annetaan yleensä ihmisille, joiden ELISA-tulos on väärä. Tällaiset indikaattorit osoittavat, että henkilö ei ole vielä kehittänyt vasta-aineita virukselle, eikä niitä voida havaita ilman moninkertaista lisääntymistä. Juuri tämä voidaan saavuttaa tekemällä PCR-veritesti.
Nämä diagnostiikka ovat tarpeen myös ensimmäisen elinvuoden lapsille, jotka ovat syntyneet HIV-positiivisesta äidistä. Tämä menetelmä on ainoa tapa määrittää luotettavasti lapsen tila.
PCR hepatiitin diagnosointiin
Polymeraasiketjureaktiomenetelmä mahdollistaa A-, B-, C-hepatiittiviruksen DNA:n havaitsemisen kauan ennen infektion vasta-aineiden muodostumista tai taudin oireiden alkamista. Hepatiitti C:n PCR-analyysi on erityisen tehokas, koska 85 %:ssa tapauksista tämä sairaus on oireeton ja ilmanoikea-aikainen hoito siirtyy krooniseen vaiheeseen.
Ajankohtainen taudinaiheuttajan havaitseminen auttaa välttämään komplikaatioita ja pitkäaikaista hoitoa.
Kattava PCR-tutkimus
Monimutkainen PCR-analyysi: mikä se on? Kyseessä on polymeeriketjureaktiomenetelmällä tehty tutkimus, joka sisältää useiden infektiotyyppien määrityksen samanaikaisesti: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, sytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes tyypit 1 ja 2, gonorrhea, papilloomavirus. Tällaisen diagnostiikan hinta vaihtelee 2000 - 3500 ruplaa. riippuen klinikasta, käytetyistä materiaaleista ja laitteista sekä analyysin tyypistä: kvalitatiivinen tai määrällinen. Mitä sinun tapauksessasi tarvitaan - lääkäri päättää. Joissakin tapauksissa riittää vain taudinaiheuttajan läsnäolon määrittäminen, toisissa, esimerkiksi HIV-infektiossa, kvantitatiivisella tiitterillä on tärkeä rooli. Kun diagnosoidaan kaikki edellä mainitut patogeenit, tutkimusta kutsutaan "PCR-12-analyysiksi".
Analysointitulosten transkriptio
PCR-analyysin purkaminen ei ole vaikeaa. Indikaattorilla on vain 2 asteikkoa - "positiivinen tulos" ja "negatiivinen tulos". Kun taudinaiheuttaja havaitaan, lääkärit voivat vahvistaa taudin olemassaolon 99 %:n varmuudella ja aloittaa potilaan hoidon. Kvantitatiivisella menetelmällä tartunnan määrittämiseksi vastaava sarake osoittaa havaittujen bakteerien numeerisen indikaattorin. Vain lääkäri voi määrittää taudin laajuuden ja määrätä tarvittavan hoidon.
Joissakin tapauksissa, esimerkiksi määritettäessä HIV-tartuntaa PCR:llä, negatiivisen tuloksen jälkeen on tarpeen suorittaa lisätutkimuksia saatujen indikaattoreiden vahvistamiseksi.
Missä testataan?
Missä PCR-testi otetaan: julkisella klinikalla vai yksityisessä laboratoriossa? Valitettavasti kunnallisissa hoitolaitoksissa laitteet ja menetelmät ovat usein vanhentuneita. Siksi on parempi antaa etusija yksityisille laboratorioille, joissa on nykyaikaiset laitteet ja korkeasti koulutettu henkilökunta. Lisäksi yksityisellä klinikalla saat tuloksia paljon nopeammin.
Moskovassa monet yksityiset laboratoriot tarjoavat PCR-analyysejä erilaisille infektioille. Esimerkiksi sellaisilla klinikoilla kuin Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, PCR-analyysi suoritetaan. Tutkimuksen hinta on alkaen 200 ruplaa. yhden taudinaiheuttajan tunnistamiseen.
Voidaan päätellä, että tartuntatautien diagnosointi PCR:llä on useimmissa tapauksissa nopea ja luotettava tapa havaita taudinaiheuttaja elimistössä infektion varhaisessa vaiheessa. Mutta silti tietyissä tapauksissa kannattaa valita muita diagnostisia menetelmiä. Vain asiantuntija voi määrittää tällaisen tutkimuksen tarpeen. PCR-analyysin purkaminen vaatii myös ammattimaista lähestymistapaa. Noudata lääkärisi neuvoja äläkä ota testejä, joita et tarvitse.
