Kolorimetrinen menetelmä - analyysi, joka perustuu tutkittujen ja tunnettujen aineiden värikylläisyyden vertailuun. Fysikaalisten ja kemiallisten testien tulokset ovat arvokkaita monille tieteenaloille, mutta eniten tutkimusta käytetään lääketieteessä.
Kolimetrisen menetelmän ydin
Aineiden kemiallisen koostumuksen määrittämiseksi on monenlaisia testejä. Jotkut niistä ovat yleismaailmallisia ja niitä käytetään laaj alti eri aloilla, toiset ovat erityisiä ja tarkkoja. Kolorimetrinen menetelmä on universaali.
Analysoinnin ydin on se, että liuoksen, jonka pitoisuus on tuntematon, värikylläisyyttä verrataan standardiliuoksen väriin. Analyysin aikana tutkitun komponentin vuorovaikutuksen seurauksena tietyn reagenssin kanssa muodostuu värillinen yhdiste. Reaktion päätyttyä saatua sävyä verrataan liuosten väriin, joiden pitoisuus on jo tiedossa.
Usutaan, että kolorimetrian perustaja on Robert Boyle. Hän käytti puristamistatanniinit erottamaan raudan liuoksessa olevasta kuparista. Boyle huomasi, että mitä suurempi raudan pitoisuus liuoksessa on, sitä rikkaampi liuoksen sävy oli.
kolorimetria
Kolimetria on menetelmä aineen määrän määrittämiseksi liuoksissa. Analyysi perustuu Bouguer-Lambert-Beer-lakiin: kun valonsäde osuu tiheään absorboivaan aineen kerrokseen, sen intensiteetti heikkenee.
Aineen pitoisuuden määrittämiseen käytettävä kolorimetrinen menetelmä voi käyttää visuaalista vertailua tai vertailua käyttämällä erikoislaitteita värin voimakkuuden mittaamiseen. Vertailu tehdään suoralla ja kompensoivalla tavalla.
- Suoraan. Menetelmässä verrataan testiliuoksen väritasoa nesteen tietyssä tiheydessä ja lämpötilassa vertailuliuokseen. Valokolorimetrejä ja spektrofotometrejä käytettäessä vertailuliuoksena käytetään tislattua vettä. Laitteet mittaavat virran voimakkuutta, joka riippuu valon voimakkuudesta.
- Korvaava. Menetelmä perustuu tutkitun näytteen värin tuomiseen vertailunäytteeseen. Tulos saavutetaan lisäämällä liuotinta tai lisäämällä värjätyn alustan kerroksen korkeutta.
Spektrofotometrin, monokromaattorin ja muiden tarkkuusinstrumenttien käyttö yksinkertaistaa entisestään jo ennestään yksinkertaista tutkimusmenetelmää ja mahdollistaa tulosten tarkkuuden lisäämisen. Nämä laitteet pystyvät mittaamaan valonläpäisymäärän ja määrittämään aallonpituuden.
Missä analyysiä sovelletaan
Kolimetristä analyysimenetelmää käytetään, kun tarkka kemiallinen koostumus tiedetään, vertailunäyte on olemassa ja testin ja vertailunäytteen lämpötila on sama. Jos sinun on määritettävä nopeasti värillisen aineen määrä, mutta se on niin pieni, että on mahdotonta soveltaa analyysimenetelmää.
Kolimetriaa käytetään laaj alti lääketieteessä kliiniseen biokemialliseen tutkimukseen ja muilla aloilla:
- lääketeollisuus;
- elintarvike- ja alkoholiteollisuus;
- agronomia (maaperän laadun määritys).
Hyvät ja huonot puolet
Kolimetrisellä menetelmällä, kuten kaikilla muillakin, on hyvät ja huonot puolensa.
Etuja ovat seuraavat:
- analyysin helppous, vähimmäisvalmistelumenettelyt;
- testausmahdollisuus pienelläkin määrällä testimateriaalia;
- kalleille laitteille ei ole tarvetta, vaikka nykyaikaisia laitteita, jotka eivät ole halpoja, on viime aikoina käytetty yhä enemmän. Mutta ne antavat tarkimman tuloksen.
Haitat: alhainen analyysin tarkkuus verrattuna analyyttisiin menetelmiin.
Biureettimenetelmä proteiinin määrittämiseen
Veriseerumin proteiini on homeostaasin tilaa kuvaava indikaattori. Makromolekulaarisen yhdisteen pitoisuuden nousua veressä kutsutaan hyperproteinemiaksi, alhaista pitoisuutta kutsutaan hypoproteinemiaksi.
Proteiinit sisälläveriseerumilla on erilainen koostumus, rakenne, ominaisuudet, ne suorittavat erilaisia tehtäviä. Ne on jaettu entsyymeihin, hormoneihin, immunoglobuliineihin ja muihin. Kaikilla proteiiniryhmillä on joukko yhteisiä ominaisuuksia, joiden perusteella on kehitetty menetelmiä makromolekyylisten orgaanisten yhdisteiden määrittämiseen biologisissa nesteissä.
Kliinisen biokemian menetelmistä useimmiten käytetään kolorimetrisiä menetelmiä proteiinin määrittämiseen. Ne ovat suhteellisen halpoja, mikä on tärkeää budjettiorganisaatioille. ja ovat melko yksinkertaisia. Yleisin on biureettimenetelmä. Menetelmän ydin: emäksisessä ympäristössä olevat proteiinit reagoivat kuparisulfaatin kanssa ja muodostavat violetteja yhdisteitä. Veren proteiinipitoisuuden määrää värjäyksen kylläisyys. Biomateriaali analyysiä varten otetaan aamulla tyhjään mahaan.
Analyysi on erittäin tarkka, mutta on olemassa tekijöitä, jotka vaikuttavat veren proteiinipitoisuuteen:
- fyysinen aktiivisuus juuri ennen biomateriaalinäytteenottoa;
- raskauden ja imetyksen viimeiset viikot;
- lääkkeiden Corticotropin, Miscleron, Clofibrate käyttö lisää veren proteiinipitoisuutta ja Pyratsinamidin ja estrogeenin käyttö - pitoisuuden vähentämiseksi;
- käden väärä asento biomateriaalinäytteenoton aikana.
Raudan määritys
Veren raudan määrä on yksi tärkeimmistä indikaattoreista erilaisten sairauksien diagnosoinnissa. Aine on keskittynyt hemoglobiiniin, joka varmistaa hapen kuljetuksen kudoksiin. vartenraudan määritys kolorimetrisellä menetelmällä, useimmiten pääreagenssina käytetään batofenantroliiniliuosta (0,02 %). Biomateriaali - seerumi ilman hemolyysin jälkiä.
Menetelmän ydin: rauta-ionien ja sulfatoituneen batofenantroliinin vuorovaikutus muodostaa värillisen kompleksin, jonka kylläisyys määritetään fotometrisesti. Kirkkaan liuoksen saamiseksi on noudatettava biomateriaalin näytteenottosääntöjä, mutta rauta-ligandikompleksien optisten tiheysten määrittämiseksi tarkasti rauta vapautuu hemoglobiinista käyttämällä hydroksyyliamiinia ja pesuaineita (natriumdodekyylisulfaatti). Testitulos määrittää patologian olemassaolon ja asteen. Normaalin rautapitoisuuden tulisi olla:
- 14, 2 – 26,0 µmol/l (miehet);
- 10, 6-21, 7 mol/L (naiset).
Raudanpuute liittyy yleensä verenhukkaan, riittämättömään ravinnonsaantiin tai huonoon imeytymiseen ruoansulatuskanavasta.
kolesterolitesti
Kolesteroli on orgaaninen aine, jota löytyy monien organismien, myös ihmisten, soluseinistä. Se on välttämätön kolekalsiferolin ja steroidihormonien tuottamiseksi. Kolesterolitasoa 3,37-5,2 mmol/l pidetään normaalina. Kohonnut pitoisuus on yksi ateroskleroosin tärkeimmistä syistä.
Kolimetrisillä menetelmillä kolesterolin määrittämiseksi voit tunnistaa verisuonisairaudet varhaisessa vaiheessa. Patoanatomisten tulosten mukaan iskemian kuolettava lopputulos, lipofiilisen alkoholin pitoisuus potilaissaoli 6,5-7,8 mmol/l.
Kolimetrisen menetelmän periaate on, että 3beta-hydroksi-steroidioksidoreduktaasi hapettaa kolesterolia, jolloin vapautuu vetyperoksidia, joka muuttaa p-aminoatipyriinin värilliseksi yhdisteeksi. Kolesterolipitoisuuden määrää sen värin kylläisyys.
Lapselle suoritettaessa on otettava huomioon, että kolesterolin pitoisuus lapsuudessa ei saa ylittää 4,1 mmol / l.
Mikä on entsymaattinen kolorimetrinen menetelmä?
Entsymaattiset testit perustuvat korkeaaktiivisten entsyymien reaktioiden käyttöön. Niitä käytetään laajasti analyyttisessä kemiassa erilaisten aineiden määrittämiseen nitraatti-ioneista makromolekyyleihin.
Entsymaattiset (entsymaattiset) menetelmät ovat spesifisiä, ja ne mahdollistavat tiettyjen aineiden analysoinnin muiden samank altaisten aineiden läsnä ollessa. Yleisimmät menetelmät, jotka perustuvat entsyymin käyttöön - glukoosioksidaasi. Testiä käytetään veren glukoosipitoisuuden määrittämiseen. Testin tarkkuus mahdollistaa sen käytön hypoglykeemisten aineiden annostuksen säätämiseen potilailla, joilla on tyypin 2 diabetes.
Glukoosihapetinmenetelmää pidetään yhtenä parhaista kvantitatiivisista menetelmistä glukoosin määrittämiseen. Sekä verta (kapillaari) että seerumia voidaan käyttää biomateriaalina, mutta plasma on parempi, koska sen hematokriittipitoisuus on pienempi, mikä vaikuttaa negatiivisesti tuloksen tarkkuuteen.
Käytetään pääasiassa fotometrian kineettistä menetelmää. Sen ydin on siinä tosiasiassaglukoosioksidaasin ja peroksidaasin vakiintunut suhde, tietyn ajan reaktion alkamisen jälkeen värillisen yhdisteen muodostumisnopeus on oikeassa suhteessa näytteen glukoosipitoisuuteen. Testin tärkein etu on, että kolmannen osapuolen yhdisteiden läsnäolo näytteessä ei vaikuta tulokseen. Menetelmässä on myös haittapuoli - testiin tarvitaan kalliita saksalaisten tai ruotsalaisten valmistajien mittalaitteita.
Johtopäätös
Kolimetrinen menetelmä on tarkka ja helppokäyttöinen. Sen käyttö lääketieteessä mahdollistaa erilaisten patologisten muutosten havaitsemisen varhaisessa vaiheessa. Uusien teknologioiden käyttöönoton myötä menetelmää parannetaan ja siitä tulee yhä suositumpi.
