Hepatiitti C on yhdestä tai useammasta RNA-molekyylistä koostuvan Flaviviridae HCV -viruksen aiheuttama maksatulehdus. Yleensä potilaalle suoritetaan joukko diagnostisia toimenpiteitä hepatiitti C:n toteamiseksi. PCR on analyysi, joka vahvistaa diagnoosin tarkasti. Usein johtopäätöksen tekevät lääkärit, kun potilaalla on jo ensimmäiset taudin merkit.
Mikä on C-hepatiitti
Veren tai seksuaalisen kontaktin välityksellä tarttuvan virusinfektion aiheuttamaa maksavauriota kutsutaan lääketieteessä hepatiitti C:ksi, jonka aiheuttaja on Flaviviridae-heimon ei-sellulaaristen tartunnanaiheuttajien RNA:ta sisältävä virus. Infektio voi pysyä kehossa pitkään näyttämättä itseään. Siksi hepatiitti C (diagnoosina) katsotaan oikeutetuksi vain silloin, kun mikro-organismi havaitaan verikokeella PCR RNA RNA:ta käyttäen.
Flavivirusta ei tuoteta keinotekoisesti kasvatetuissa eristetyissä soluissa. Lisääntymisprosessissa tartunnanaiheuttaja luo immunologisesti erillisiä modifikaatioita. Nämä tekijät estävät kehoa antamastaasianmukainen suojavaste, ja asiantuntijoiden on vaikea kehittää tehokasta rokotetta.
Virus tarttuu parenteraalisesti. Infektiota varten sen on päästävä riittävä määrä suoraan verenkiertoon.
Mitä testejä hepatiitti C:lle tehdään
Maksan viruspatologiat diagnosoidaan laboratoriotesteillä. Hepatiitti C:n kliiniset tutkimukset suoritetaan tutkimalla vieraita ja vaarallisia antigeenejä tai proteiiniyhdisteitä (vasta-aineita) potilaan biomateriaalissa, pääasiassa veressä.
- Entsymaattinen immunomääritys (ELISA). Menetelmä perustuu lgM-vasta-aineiden havaitsemiseen verestä. Immunoglobuliinia pidetään suurimpana ja se on pentameeri. Se ilmenee lymfosyyttien ensisijaisena suojavasteena tuntemattomaan vieraaseen aineeseen.
- Radioimmunomääritys (RIA) - lgM-immunoglobuliinin kvantitatiivinen määritys käyttämällä leimattua radioaktiivista jodin isotooppia.
- Hepatiitti C:n PCR - viruksen RNA:n määritys biomateriaalista (verestä). Tämä analyysi vahvistaa diagnoosin luotettavasti.
IgG-testaus ei ole luotettava. Sen esiintyminen veren seerumissa voi viitata flaviviruksen lisäksi myös toiseen menneeseen infektioon, jolla on sama patogeeni.
Mikä määrittää PCR-analyysin
Polymeraasiketjureaktio (PCR) perustuu tietyille patogeeneille spesifisten DNA-alueiden tunnistamiseen tutkimusmateriaalinäytteistä (epiteeli, veri). Analyysin avulla voidaan tunnistaa patogeeniset pienimmät organismit (virukset) havaitsemalla niiden RNA tai DNA biologisesta materiaalista.
Laboratoriomenettely vasta-aineiden havaitsemiseksi C-hepatiitti PCR suoritetaan 3 vaiheessa:
- Valitse. Tutkittu biomateriaali puhdistetaan epäpuhtauksista ja DNA saadaan kromatografiakolonnin liikkuvassa faasissa.
- Vahvistus. Analyysi suoritetaan laite-termostaattisyklisessä. Se lämmittää ja jäähdyttää koeputkia tietyllä syklisyydellä. Yhdessä tutkimuksessa suoritetaan jopa 35 sykliä. Tuloksena on riittävä määrä DNA-fragmentteja patogeenin havaitsemiseksi, tunnistamiseksi ja arvioimiseksi.
- Elektroforeesi. Saadut fragmentit asetetaan geeliin, jossa on erilainen agaroosikyllästys, ja suoritetaan elektroforeesi. Tuloksena oleva elektroferogrammi analysoidaan tietokoneella.
Ei käytetä vain tavallista PCR-tutkimusta, vaan myös reaaliaikaista PCR-analyysiä. Tämä on reaaliaikainen diagnostiikka. Menetelmä mahdollistaa kvalitatiivisen ja kvantitatiivisen analyysin, jonka avulla voidaan tunnistaa taudin muodostuminen ja dynamiikka sekä määrätä hoitoa, jonka tarkoituksena on poistaa patologian alkuperän syy. Reaaliaikaista PCR:ää käytetään myös infektoivien tekijöiden puhtaan viljelmän määrittämiseen (genotyypitys).
Kuinka polymeraasiketjureaktiotesti tehdään
Diagnoosissa voidaan käyttää mitä tahansa ihmisen biologista nestettä. Biomateriaali hepatiitti C:n testaamiseen on yleensä verta.
Näytteenotto diagnostiikkaa varten suoritetaan menettelyssätoimisto. Käytä veren ottamiseen kertakäyttöisiä koeputkia, joissa on veren hyytymistä estävää ainetta. Tartunta-aineiden leviämisen estämiseen keskittyvä toiminta auttaa välttämään toisen mikro-organismikannan pääsyn ulkopuolelta.
Veri hepatiitti C:n PCR:ää varten otetaan aamulla tyhjään mahaan. Näyte lähetetään välittömästi laboratorioon. Biomateriaalia saa säilyttää +4 - +8 celsiusasteen lämpötilassa. Säiliöt on merkitty ja niissä on ohjeet. Testitulokset ovat saatavilla 48 tunnin kuluessa, joskus aikaisemmin.
PCR-tyypit
Polymeraasiketjureaktion käyttöalue on melko laaja. Infektionistit määrittävät PCR:llä hepatiitti B:n, verta imevien hyönteisten välittämät sairaudet, AIDSin ja tuberkuloosin. Onkologiassa tätä menetelmää käyttämällä kasvainsolut havaitaan varhaisessa vaiheessa.
Analyyseja on noin neljätoista. Yhden tai toisen tyypin käyttö riippuu analyysien laajuudesta ja lopputuloksista. Jotkin PCR-tyypit ovat välttämättömiä, jos tulos tarvitaan 20 minuutin kuluessa.
C-hepatiittidiagnoosissa käytetään 3 tyyppistä polymeraasiketjureaktiota:
- Laadullinen arviointi voi olla joko positiivinen, mikä osoittaa, että kehossa on infektio, tai negatiivinen, joka osoittaa flaviviruksen puuttumisen.
- Reaaliaikainen PCR (kvantitatiivinen analyysi) - määrittää patogeenin kvantitatiivisen RNA:n IU/ml.
- Genotyypitys on analyysi, joka paljastaa viruksen tyypin (genotyypin).
Tunnistaaksesi ja määrittääksesi taudin tarkasti ja sen jälkeenkaikkia kolmea tutkimustyyppiä käytetään optimaalisen hoidon määräämiseen.
Laadullinen polymeraasiketjureaktioanalyysi
Analyysi on pakollinen kaikille, joilla on ELISA, joka on havainnut HCV-vasta-aineita. Hepatiitti C:n kvalitatiivinen PCR on standardi herkkyystesti. Menetelmä on tarkoitettu vain havaitsemiseen, eikä muita aineita lasketa tai eristää.
Vasta-aineiden havaitsemiseksi käytetään erityisiä testijärjestelmiä, joiden herkkyyskynnys on vähintään 50 IU/ml. Jos vasta-aineita havaitaan, määrätään muita selventäviä testejä. Jos tulos on negatiivinen, lisätestejä ei tehdä.
Joissakin tapauksissa väärä negatiivinen tulos voi johtua epäpätevästä laboratoriohenkilöstöstä tai huonolaatuisista reagensseista. Vakuutuksen os alta on parempi tehdä analyysi uudelleen muu alta.
Kvantitatiivinen PCR
Menetelmää käytetään suoraan tutkimaan flavivirusten määrää yhdessä reaktiosyklissä. Tarkkaa mittausta varten käytetään hybridisaatioon käytettyjä DNA-fragmentteja tai fluoresoivasti leimattuja alukkeita. Edullinen tunnistusvaihtoehto SYBL Green -värillä. Väriaine kiilautuu pieneen DNA:n uraan ja muuttuu siniseksi laserilla säteilytettäessä.
Konsentraatio määrittää laite-vahvistin digitaalisessa muodossa. Arvot voivat vaihdella hieman laboratorioiden välillä, joten niitä tulee verrata viitearvoihin.
Kvantitatiivinen PCRC-hepatiitti auttaa valitsemaan optimaalisen lääkkeiden annoksen ja määrittämään hoidon keston. Tutkimustiheys riippuu taudin vaiheesta, genotyypin tyypistä ja määrätystä hoitokunnasta.
Genotyypin määritys
C-hepatiittiviruksella on vaihteleva geneettinen rakenne. Lukuisat muutokset tekevät rokotteen luomisen mahdottomaksi ja myös monimutkaistavat hoitoa. Yhteensä 11 genotyyppiä ja 100 alatyyppiä on tunnistettu ja kirjattu. Entisen Neuvostoliiton maissa hepatiitti C -tartunnan saaneilla henkilöillä PCR havaitsee pääasiassa genotyypit 1b ja 3.
Jos jokin genotyypeistä on läsnä, kirroosi tai maksasyövä voi iloita. Siksi on niin tärkeää havaita virus ajoissa.
Joillekin potilaille tietyt HCV:tä vastaan suunnitellut lääkkeet ovat myrkyllisiä. Genotyypityksen avulla voit määrittää proteiinin tyypin ja määrätä tehokkaan lääkkeen.
Tyyppitestien tuloksissa on numero, jossa on pieni latinalainen kirjain, joka ilmaisee viruksen genotyypin. Jos HCV havaitaan, mutta sitä ei tyypitetty, tämä tarkoittaa, että henkilöllä on genotyyppi, joka ei ole tyypillinen tietylle maantieteelliselle alueelle.
Analyysitulokset
Lääkäri käsittelee tulosten tulkintaa. Vain useiden tutkimusten tiedot (yhdessä anamneesin ja tutkimuksen kanssa) voivat antaa todellisen kokonaiskuvan sairaushistoriasta.
- Terveellä ihmisellä biomateriaalin kvalitatiivisen reaktion testi ei havaitse mitään. Jos arvo "havaittu", infektio vahvistetaan ja potilasvaatii lisädiagnoosin ja hoidon.
- Tarvitsaajien määrän määrittäminen mahdollistaa kehon viruskuormituksen arvioinnin. Normaalisti hepatiitti C:n kvantitatiivinen PCR ei havaitse taudinaiheuttajaa. Jopa 810^5 indikaattoria pidetään alhaisena kuormituksena, ja se takaa suotuisan lopputuloksen asianmukaisella hoidolla. Korkeammat arvot vaativat perusteellista tutkimusta ja pitkäkestoisen hoidon määrittämistä, jonka positiivista lopputulosta kukaan ei voi taata.
- Positiiviset genotyyppitulokset osoittavat, mikä genotyyppi tunnistetaan. Negatiivinen tulos osoittaa joko flaviviruksen puuttumisen tai genotyypin, joka ei ole tyypillinen tälle alueelle.
Mitä positiivinen PCR-testi osoittaa
Jokainen vakava sairaus vaatii kattavan diagnoosin. Positiivinen hepatiitti C PCR vahvistaa diagnoosin, mutta ennusteita voidaan tehdä vasta lisälaboratorio- ja instrumenttitutkimusten jälkeen.
Viruksen havaitseminen ei anna täydellistä kuvaa patologiasta. On tarpeen tunnistaa sen tyyppi ja luonne, selvittää, kuinka se vaikuttaa maksaan ja muihin elimiin. HCV:n varhaisella havaitsemisella on usein suotuisa terapeuttinen tulos.
Negatiivinen PCR ja positiivinen ELISA
Havaittaessa maksavauriolle tyypillisiä oireita, on suuri todennäköisyys, että infektio on jo päässyt elimistöön. Siksi sinun tulee ottaa yhteyttä hepatologian tai infektiotautiasiantuntijaan. Haastattelujen aikana asiantuntija kerää anamneesin ja määrää tarvittavan tutkimuksen.
JosC-hepatiitti-PCR-tutkimusten tulokset ovat negatiiviset ja entsyymi-immunomääritys on positiivinen, mikä viittaa flaviviruksen vasta-aineiden esiintymiseen veressä. Tämä tapahtuu yleensä, kun infektio pääsee kehoon pieninä määrinä, joten immuunijärjestelmä selviytyi siitä itse. Mutta tällaisia ihmisiä pidetään edelleen tartunnan saaneina, ja heidät vaaditaan tutkimaan kuuden kuukauden välein. Jos henkilöltä evätään tällaisten testitulosten perusteella ilmainen lääkärintarkastus, on parempi tehdä PCR maksua vastaan terveyden ylläpitämiseksi, ja jos tulokset ovat positiivisia, ota yhteyttä erikoislääkäriin diagnoosia ja hoitoa varten.
Menetelmän edut ja haitat
C-hepatiittidiagnoosia määritettäessä PCR:llä on useita etuja:
- Patogeenin varhainen havaitseminen.
- Tarkka viruksen määritelmä.
- Diagnostiikan tehokkuus.
- Virheiden vähimmäismäärä.
- Suuri herkkyys.
Menetelmän haitat:
- Korkeat analyysikustannukset. Testi vaatii kalliita laitteita, reagensseja ja erittäin pätevää lääkintähenkilöstöä. Kaikki yhdessä muodostavat huomattavan määrän.
- Tiukat vaatimukset biomateriaalin kuljetukselle.
Maksatulehduksen hoito
PCR-analyysiä hepatiitti C -viruksen var alta pidetään diagnoosin perustana, mutta ei lopullisena. Jotta hoito olisi tehokasta, tarvitaan useita lisälaboratorio- ja instrumentaalitutkimuksia. Kaiken ohituksen jälkeendiagnostiset toimenpiteet lääkäri määrää hoidon:
- ruokavalio 5 on määrätty.
- Alkoholi on kokonaan poissuljettu.
- Interferonin ja ribaviriinin yhteisvastaanotto 25 päivän ajan.
- Hepaprotektoreiden kurssit "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Erityistapauksissa käytetään erillistä plasmafereesiä.
Hepatologin määräämiä lääkkeitä käytetään säännöllisesti annostusta muuttamatta. Lääkkeiden ottamisen keston määrää lääkäri läpäistyään kontrollitestit. Hoitojakson päätyttyä sinun tulee käydä lääkärissä kuuden kuukauden välein.
PCR-diagnostiikan avulla voidaan tunnistaa C-hepatiittia aiheuttava tekijä varhaisessa vaiheessa. Tämä edistää hoidon tehokkuutta ja estää taudin siirtymisen sellaisiin vaarallisiin muotoihin kuin kirroosi ja hepatosellulaarinen karsinooma.
